Biotecnología y mejoramiento vegetal by Consejo Argentino para la Información y el Desarrollo de la PDF

By Consejo Argentino para la Información y el Desarrollo de la Biotecnología

ISBN-10: 9875211389

ISBN-13: 9789875211384

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Los núcleos aislados se colocan directamente sobre un portaobjetos y se secan al aire y deshidratan en serie alcohólica. Este procedimiento, que también puede ser aplicado a suspensiones celulares, no presenta mayores problemas de permeabilidad para las sondas. Las regiones de hibridación de las sondas sobre las secuencias de copia simple se observan como señales individuales dentro del núcleo (dos señales en los núcleos diploides), cada una de ellas correspondiente a cada uno de los cromosomas homólogos.

La principal limitante de ARN-ISH radica en que, generalmente, se puede analizar una sola sonda por cada hibridación. No obstante, esta técnica se ha utilizado para comparar los niveles y sitios de expresión de secuencias en numerosas especies de plantas. Uno ejemplo de ello, es el análisis espacial de transcritos expresados diferencialmente en plantas con reproducción sexual y apomícticas de Paspalum notatum (Fig 2 G y H). 9 FISH cuantitativo para estimar la expresión génica (QUISH) A diferencia de la técnica de ARN-FISH, que utiliza anticuerpos sobre cortes de tejidos para la detección de la expresión génica, QUISH se basa en la hibridación de oligonucleótidos gen-específicos marcados con fluorocromos directamente sobre porciones de tejidos u órganos enteros, combinada con el análisis de secciones ópticas realizadas con un microscopio láser confocal de barrido.

4 Hibridación in situ genómica (GISH) Esta técnica se utiliza para identificar los diferentes genomios presentes en un organismo híbrido o alopoliploide. Aunque aplica todos los principios de FISH, difiere de ésta porque las sondas que utiliza están constituidas por ADN genómico total y no por un fragmento de ADN de secuencia conocida. El ADN utilizado para construir estas sondas es extraído mediante protocolos estándares y luego es marcado por nick translation o por amplificaciones al azar usando cebadores cortos (random priming).

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by Charles
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